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21.(13分)天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进人血液，从而延缓了其降血糖作用，药效显著降低。这些聚体的形成主要与胰岛素B链第20一29位的氨基酸相互作用有关，若使B28位脯氨酸替换为天门冬氨酸或者将它与B29位的赖氨酸交换位置，则可降低其聚合作用。可利用蛋白质工程技术改变这些残基，再利用基因工程技术将改造好的胰岛素基因导入大肠杆菌，便可以生产能长期保存且高效的胰岛素，已知：M是天然胰岛素基因，M1是改造后的胰岛素基因。重复进行⑤1N个NNN大量的A胰岛素人胰岛细胞nAKmRNA→人胰岛素大肠杆菌→人胰岛素引物3,3引物2BamH IC基因M1D31基因M5Ti质粒引物1物4PstHindⅢBamH I重组质粒PstHindⅢ基因M1BamH I G4GATCCHind III AAGCTTPst IGTGCAG一代表两段特定DNA序列注：↓代表酶切位点甲乙()利用蛋白质工程技术对天然胰岛素进行改造时，首先必须根据预期设计,进一步推测氨基酸序列，最终通过基因编辑技术，改造天然胰岛素基因，将改造好的基因导入大肠杆菌体内使其表达，合成高效胰岛素。(2)图甲所示的基因定点突变技术需要次PCR才能获得基因M1,要获得产物A需要用到的引物是和(3)通过图甲过程获得的基因M1仍需要大量扩增，此时选择的引物是和为了与图乙中的T质粒相连，还需要分别在M1两条链的(选填5或3)端加入限制酶的识别序列(4)构建基因表达载体时，M1基因必需插人到Ti质粒的中，重组质粒导入大肠杆菌时需要用处理，使大肠杆菌成为感受态细胞。,计的国【高三生物学第9页（共9页）】
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